Ce este analiza PCR?
Analiza reacției în lanț a polimerazei (PCR) este o tehnică de laborator concepută pentru a identifica cantități mici de ADN într-o probă printr-un proces cunoscut sub numele de amplificare . În timpul amplificării prin PCR, ADN-ul de interes este copiat în mod repetat, până când este suficient pentru analiză și detectare. De exemplu, PCR poate fi folosit pentru a identifica cantitati mici de ADN din organismele care produc gonoree sau chlamydia care sunt prezente intr-o mostra de urina .
Cum funcționează PCR?
Prima etapă a PCR este de a încălzi eșantionul astfel încât ADN-ul dublu catenar se separă în două catene singulare - aceasta se numește denaturare . Apoi primeri , probe scurte de ADN care se potrivesc până la capetele secvenței ADN de interes, sunt combinate cu ADN-ul de probă. După aceasta, o polimerază ADN este utilizată pentru a începe replicarea ADN-ului la locația primerului. În cele din urmă, ADN-ul este încălzit pentru a separa firele din nou, iar întregul proces PCR începe din nou.
Cantitatea segmentului ADN de interes prezent în proba crește exponențial cu fiecare ciclu PCR: o copie devine două, apoi devine patru, apoi devine opt, etc; astfel încât, în general, sunt necesare numai 20-40 de cicluri pentru a determina dacă ADN-ul în cauză este prezent (și, dacă este, să se ofere un eșantion suficient pentru analiză).
Toate etapele unei reacții în lanț a polimerazei - denaturarea ADN-ului, aplicarea primerilor și alungirea ADN-ului se întâmplă la diferite temperaturi, astfel încât, după amestecarea inițială, etapele pot fi controlate printr-un procedeu numit termocycling , în care temperatura este menținută la nivelurile necesare pentru o perioadă suficient de lungă pentru ca fiecare etapă să aibă loc.
Astfel, PCR este o modalitate eficientă de amplificare a cantității de ADN țintă într-un singur tub de testare cu puțină nevoie de intervenție umană.
Reacția în lanț a polimerazei a reprezentat o revoluție în tehnica biologică când a fost dezvoltată pentru prima oară la începutul anilor 1980, iar creatorul PCR, Kary Mullis, a câștigat Premiul Nobel pentru Chimie pentru activitatea sa din 1993.
De ce este PCR relevant pentru testarea STD?
Reacția în lanț a polimerazei și tehnicile conexe, cum ar fi reacția în lanț a ligazei , se dovedesc a fi de importanță crescândă pentru testarea STD. Acest lucru se datorează faptului că aceste tehnici pot identifica direct cantități mici de ADN sau ARN viral în probe. Identificarea codului genetic al unui agent patogen nu necesită ca agentul patogen să fie în viață - cum ar fi cultura bacteriană sau cultura vială . De asemenea, nu este nevoie ca infecția să fi avut loc cu mult timp în urmă, pentru ca oamenii să fi dezvoltat o reacție detectabilă a anticorpilor (așa cum este detectată prin ELISA ). Aceasta înseamnă că tehnicile PCR pot detecta uneori bolile mai devreme decât alte teste și fără cât de mult trebuie să vă preocupați de menținerea probelor în viață sau de testare exact la momentul potrivit.